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分子生物學(xué)產(chǎn)品

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DNA 退火緩沖液(5×) Annealing Buffer for DNA Oligos (5×)

發(fā)布者:  發(fā)布時間:2017-10-16 16:43:43

DNA退火緩沖液(

Annealing Buffer for DNA Oligos (5×)


產(chǎn)品貨號:JY04011       規(guī)格:2 mL       銷售價(jià)格:¥ 50

產(chǎn)品貨號:JY04012       規(guī)格:5 mL       銷售價(jià)格:¥ 100


Annealing Buffer for DNA Oligos 說明書.pdf


產(chǎn)品簡介

Annealing Buffer for DNA Oligos (5×),DNA寡核苷酸退火緩沖液,該退火緩沖液不僅可以用于常規(guī)DNA Oligos 的退火,而且特別適合于較難退火的構(gòu)建RNAi siRNA shRNA質(zhì)粒的DNA Oligos,可以有效避免DNA Oligos自身形成發(fā)夾結(jié)構(gòu),并且兩條Oligos退火后可以直接和經(jīng)酶切純化的質(zhì)粒連接。通常轉(zhuǎn)化后可以得到大量的陽性克隆。

保存條件

常溫配送。一個月內(nèi),4 oC保存。-20 oC長期保存,至少1年有效。

注:瓶身標(biāo)記MFG為生產(chǎn)日期,因?yàn)樯c分子試劑貯存得當(dāng),可用時間長于有效期,故標(biāo)出生產(chǎn)日期,方便提示試劑實(shí)際已貯存時間。

注意事項(xiàng)

1DNA退火緩沖液()只適合于DNA Oligos的退火,不能用于RNA Oligos的退火

2本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究,不得用于臨床診斷和治療,不得用于食品和藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。

使用說明

1溶解Oligos

(1) 方法一:用雙蒸水將DNA退火緩沖液()稀釋成。 → Oligos干粉用DNA退火緩沖液()配制成20 μM。取等體積DNA Oligo ADNA Oligo B混勻。

(2) 方法二:將Oligos干粉用雙蒸水配制成50 μM配置如下退火反應(yīng)體系,混勻。

image.png

NoteOligos的濃度根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行調(diào)整。

2.退火

(1) 方法一:將退火反應(yīng)體系置于PCR儀中,設(shè)置反應(yīng)條件:95℃變性2 min,-1℃/30s/cycle緩慢降溫至25℃。程序設(shè)置以Bio-RadT100為例為:1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 0:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2, 70×; 4. 4℃, ∞。

  對于易形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)的Oligos可以延長時間降溫時間:95℃變性2 min-1℃/90s/cycl緩慢降溫至25℃。程序設(shè)置以Bio-RadT100為例為:1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 1:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2, 70×; 4. 4℃, ∞。

(2) 方法二:將退火反應(yīng)體系放于95°C水浴鍋,持續(xù)2 min,后將退火反應(yīng)體系置于一杯1 L,95°C的水中,讓其自然冷卻至室溫。若是易形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)的Oligos,可以將95°C水放于保溫杯中開蓋降溫。

Note緩慢降溫對形成正確的結(jié)構(gòu)是非常有幫助的,降溫過快將導(dǎo)致錯誤結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生。

3.退火結(jié)束后可直接用于連接反應(yīng),也可以-20oC凍存?zhèn)溆?。若進(jìn)行酶切等其它反應(yīng),可用純化試劑盒進(jìn)行純化,或者確保退火產(chǎn)物在反應(yīng)體系中體積不超過5%,以避免退火緩沖液對后續(xù)酶反應(yīng)體系的干擾。



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