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細胞生物學(xué)產(chǎn)品

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MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒 MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

發(fā)布者:  發(fā)布時間:2022-05-08 22:56:03

MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒

MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

產(chǎn)品貨號JY02021    規(guī)格500 T   銷售價格¥200

產(chǎn)品組分:MTT粉末 25 mg +MTT溶劑 5 mL +甲臜溶解液 55 mL

MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒 說明書.pdf


產(chǎn)品簡介

MTT全稱為3-(4,5-Dimethyl-2-Thiazolyl)-2,5-Diphenyl Tetrazolium Bromide,(Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide),中文名簡稱:噻唑藍。CAS298-93-1,分子式為C18H16BrN5S,分子量為414.32

MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)是一種非常經(jīng)典的細胞增殖和細胞毒性檢測試劑盒,被廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲臜(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)或特定的甲臜溶解液能溶解細胞中的甲臜,用酶標(biāo)儀在570 nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數(shù)量。細胞增殖越多越快,則吸光度越高;細胞毒性越大,則吸光度越低。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。本試劑盒本底低,靈敏度高,線性范圍寬,使用方便。

本公司提供兩種MTT檢測試劑盒:JY02021 MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒JY02022 MTT檢測試劑盒。傳統(tǒng)MTT檢測方法中,由于產(chǎn)生的甲臜是不溶于水的,需要先將上層反應(yīng)液移除,再加入DMSO溶解甲臜,此步操作容易吸走甲臜造成實驗誤差,且增加了懸浮細胞實驗的困難?!?/span>JY02021 MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒”采用了獨特的甲臜溶解液配方,無需去除原有的培養(yǎng)液,可以直接加入甲臜溶解液溶解甲臜,從而避免了由于去除培養(yǎng)液時甲臜被部分去除而引起的誤差,且懸浮細胞更適用。而“JY02022 MTT檢測試劑盒”保留了DMSO溶解甲臜的策略,但顯著縮短了甲臜溶解時間,從原來的數(shù)小時縮短為數(shù)分鐘,節(jié)約了實驗時間。

本公司還提供更優(yōu)的CCK-8試劑盒(JY02031,適用于貼壁和懸浮細胞的增殖和毒性檢測。

保存條件

冰袋運輸;未開封時4oC保存,1年有效。開封后,將MTT粉末配制成MTT溶液,需-20oC避光保存;甲臜溶解液4oC和室溫保存均可。

注意事項

1使用96孔板進行檢測,若細胞培養(yǎng)時間較長,需注意孔板外圈培養(yǎng)液蒸發(fā)??梢詶売猛馊Π蹇?,改加PBS,水或培養(yǎng)液并將孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方,以緩解培養(yǎng)液蒸發(fā)。

2MTT配制成溶液后為黃色,需避光保存,長時間光照會導(dǎo)致失效。當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時,請勿使用。

3甲臜溶解液低溫保存可能會產(chǎn)生沉淀,只需 37℃水浴使其充分溶解,混勻后即可使用。

4.加入甲臜溶解液后請適當(dāng)輕輕混勻,但須注意避免產(chǎn)生泡沫。

5.本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究,不得用于臨床診斷和治療,不得用于食品和藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。

6.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明

AMTT溶液的配制:

5 mL MTT溶劑溶解25 mg MTT,配制成5 mg/mLMTT溶液。配制后即可使用,或直接-20oC避光保存,也可以根據(jù)需要適當(dāng)分裝后-20oC避光保存。

BMTT檢測(以96孔為例):

1收集對數(shù)期細胞,調(diào)整細胞懸液濃度,鋪于96孔板。貼壁細胞1000-10000/孔,懸浮細胞10000-100000/孔(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。按照實驗需要,進行培養(yǎng)并給予藥物處理(含有藥物的培養(yǎng)基也為100 μL)。

注: 96孔板四周的32個邊孔不要使用,建議加入滅菌PBS補齊。因邊孔水分蒸發(fā)快,培液會出現(xiàn)濃縮現(xiàn)象,細胞狀態(tài)處理條件等都不再準(zhǔn)確,通常將其稱為邊緣效應(yīng)。

實驗時應(yīng)設(shè)置調(diào)零孔,對照孔和加藥孔。調(diào)零孔加培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜(無細胞的空白對照)。對照孔和加藥孔都要加細胞、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜,不同的是對照孔加溶解藥物的介質(zhì),而加藥組加入不同濃度的藥物。每組設(shè)3-6個副孔。

2.可選:若因培養(yǎng)時間較長,培養(yǎng)液蒸發(fā)導(dǎo)致每孔液面差異較大,需更換新鮮培養(yǎng)基。短期無需此步。

對于貼壁細胞,去除舊的培養(yǎng)液,更換100 μL/孔新鮮的培養(yǎng)液;對于懸浮細胞,離心96孔板,去除盡可能多的上清液,然后加入100 μL/孔新鮮的培養(yǎng)液重懸細胞。

3.每孔加入10 μL MTT溶液,適當(dāng)混勻,在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育4 h

4每孔加入100 μL甲臜溶解液,適當(dāng)混勻,在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)再繼續(xù)孵育。直至在普通光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)甲臜全部溶解。通常37oC孵育3-4 h左右,紫色結(jié)晶會全部溶解。如果紫色結(jié)晶較小較少,溶解時間會縮短。如果紫色結(jié)晶較大較多,溶解時間會延長,此時為加速溶解可以適當(dāng)振搖數(shù)次。

5.在570nm測定吸光度。如無570nm濾光片,可以使用560-600nm的濾光片。


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